中华人民共和国国家标准
GB/T 5009.149
果品制品－栀子黄的测定－高效液相色谱法
1 范围
本方法规定了高效液相色谱法检测食品中栀子黄色素。
本方法适用于饮料中栀子黄的测定。
本方法检出限为3.2μg/mL；标准曲线线性范围为0ng/mL~200ng/mL。
2 原理
试样中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量；栀子甙是栀子黄的主要成分，将其作为对照品。
3 试剂
试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
3.1 甲醇；
3.2 石油醚：60℃~90℃；
3.3 乙酸乙酯；
3.4 三氯甲烷；
3.5 姜黄色素；
3.6 栀子甙；
3.7 栀子甙标准溶液：称取2.75mg栀子甙标准品，用甲醇稀释至100mL混匀。即得27.5μg/mL栀子甙；
3.8 栀子甙标准使用液：分别吸取栀子甙标准溶液0，2.0，4.0，6.0，8.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL，即得0，5.5，11.0，16.5，22.0μg/mL的栀子甙标准系列溶液。
4 仪器
4.1 小型粉碎机；
4.2 恒温水浴；
4.3 高效液相色谱系统：Water’s M510泵，U6K进样器，岛津RF-535。荧光检测器，Blue chip/PC计算机和Baseline 810色谱控制程序。
5 分析步骤
5.1 试样处理
5.1.1 饮料：将试样温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜0.4μm过滤，滤液备作HPLC分析用；
5.1.2 果酒：试样通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。
5.2 测定
5.2.1 HPLC参考条件
色谱柱：粒度5μm ODS C18 150mm×4.6mm；
流动相：甲醇＋水（35+65）；
流速：0.8mL/min；
波长：240nm。
5.2.2 标准曲线
在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液0，2，4，6，8μL，进行HPLC分析，然后以峰高对栀子甙浓度作标准曲线。
5.2.3 试样测定
在实验条件下，注入5μL5.1试样处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，试样中栀子甙含量。
（下略）
