中华人民共和国国家标准
GB/T 5009.97-2003
果品制品－环己基氨基磺酸钠的测定－比色法
1 范围
本方法适用于饮料、凉果等食品中环己基氨基磺酸钠的测定，其检出限为4μg。
2 原理
在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，与磺胺重氮化后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色染料，在550 nm波长测其吸光度，与标准比较定量。
3 试剂
3.1 盐酸溶液（100g/L）；
3.2 硫酸溶液（100g/L）；
3.3 亚硝酸钠溶液（10g/L）；
3.4 三氯甲烷；
3.5 甲醇；
3.6 尿素溶液（100g/L）（临用时新配或冰箱保存）；
3.7 磺胺溶液（10g/L）：称取1g磺胺溶于10％盐酸溶液中，最后定容至100mL；
3.8 盐胺萘乙二胺溶液（1g/L）；
3.9 透析剂：称取0.5g二氯化汞和12.5g氯化钠于烧杯中，以0.01mol/L盐酸溶液定容至100mL；
3.10 环己基氨基磺酸钠标准溶液：精确称取0.1000g环己基氨基磺酸钠，加水溶解，最后定容至100mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠1mg。临用时将环己基氨基磺酸钠标准溶液稀释10倍。此液每毫升含环己基氨基磺酸钠0.1mg。
4 仪器
4.1 分光光度计；
4.2 旋涡混合器；
4.3 离心机；
4.4 透析纸。
5 试样处理
5.1 液体试样：摇匀后直接称取。含二氧化碳的样品先加热除去，含酒精的样品加40g/L氢氧化钠溶液调至碱性，于沸水浴中加热除去，制成试样。
5.2 固体样品：凉果、蜜饯类试样将其剪碎制成试样。
6 分析步骤
6.1 提取
6.1.1 液体试样：称取10.0g试样于透析纸中，加10mL透析剂，将透析纸口扎紧，放入盛有100mL水的200mL广口瓶内，加盖，透析20～24h得透析液。
6.1.2 固体试样：称取2.0g已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶（或海砂）研磨至呈干粉状，经漏斗倒入100mL容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移至容量瓶中。加水至刻度，不时摇动，1h后过滤，即得试料。准确吸取10.0mL处理后的试料提取液于透析纸中，以下操作按“6.1.1”项下进行。
6.2 测定
6.2.1 取2支50mL带塞比色管，分别加入10mL透析液和10mL标准液，于0～3℃冰浴中，加入1mL10g/L亚硝酸钠溶液，1mL100g/L硫酸溶液，摇匀后放入冰水中不时摇动，放置1h，取出后加15mL三氯甲烷，置旋涡混合器上振动1min，静置后吸去上层液，再加15mL水，振动1min，静止后吸去上层液，加10mL 100g/L尿素溶液，2mL100g/L盐酸溶液，再振动5min，静置后吸去上层液，加15mL水，振动1min，静置后吸去上层液，分别准确吸出5mL三氯甲烷于2支25mL比色管中。另取一支25mL比色管加入5mL三氯甲烷作参比管。于各管中加入15mL甲醇，1mL10g/L磺胺，置冰水中15min，取出回复常温后加入1mL1g/L盐酸萘乙二胺溶液，加甲醇至刻度，在15～30℃下放置20～30 min，用1cm比色杯于波长550 nm处测定吸光度，测得试样透析液吸光度（A）及标准液吸光度（As）。
6.2.2 另取2支50mL带塞比色管，分别加入10mL水和10mL透析液，除不加10g/L亚硝酸钠外，其他按“13.2.1”项下进行，测得水的吸光度（Aso）及不加亚硝酸钠的试样透析液吸光度（Ao）。
（下略）
