中华人民共和国国家标准
GB/T 5009.9-2003
果品制品－环己基氨基磺酸钠的测定－薄层层析法
1 范围
本方法适用于饮料、果汁、果酱中环己基氨基磺酸钠的测定，其检出限为4μg。
2 原理
样品经酸化后，用乙醚提取，将试样提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开，经显色后，根据薄层板上环己基氨基磺酸的比移值及显色斑深浅，与标准比较进行定性、概略定量。
3 试剂
3.1 氯化钠；
3.2 硫酸钠；
3.3 氢氧化胺；
3.4 盐酸（6mol/L）：取50mL盐酸加到少量水中，再用水稀释至100mL；
3.5 异丙醇；
3.6 正丁醇；
3.7 石油醚：沸程30～60℃；
3.8 乙醚（不含过氧化物）；
3.9 无水乙醇；
3.10 聚酰胺粉（尼龙-6）：200目；
3.11 环己基氨基磺酸标准溶液：精密称取0.0200g环己基氨基磺酸，用少量无水乙醇溶解后移入10mL容量瓶中，并稀释到刻度，此溶液每毫升相当于2mg环己基氨基磺酸，二周后重新配制（环己基氨基磺酸的熔点：169～170℃）；
3.12 展开剂：
3.12.1 正丁醇-浓氨水-无水乙醇（20＋1＋1）；
3.12.2 异丙醇-浓氨水-无水乙醇（20＋1＋1）；
3.13 显色剂：称取0.040g溴甲酚紫溶于100mL50％乙醇溶液，用1.2mL0.4％氢氧化钠溶液调至pH8。
4 仪器
4.1 吹风机；
4.2 层析缸；
4.3 玻璃板：5cm×20cm；
4.4 微量注射器：10 μL；
4.5 玻璃喷雾器。
5 分析步骤
5.1 试样提取
5.1.1 饮料、果酱：称取2.5g（mL）已经混合均匀的样品（汽水需加热去除二氧化碳），置于25mL带塞量筒中，加氯化钠至饱和（约1g），加0.5mL6mol/L盐酸酸化，用15、10mL乙醚提取两次，每次振摇1min，静止分层，用滴管将上层乙醚提取液通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中，用少量乙醚洗无水硫酸钠，加乙醚至刻度，混匀。吸取10.0mL乙醚提取液分两次置于10mL带塞离心管中，在约40℃水浴上挥发至干，加入0.1mL无水乙醇溶解残渣，备用。
5.2 测定
5.2.1 聚酰胺粉板的制备：称取4g聚酸胺粉，加1.0g可溶性淀粉，加约14mL水研磨均匀合适为止，立即倒入涂布器内制成面积为5cm×20cm，厚度为0.3mm的薄层板6块，室温干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存、备用。
5.2.2 点样：薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器于板中间点4μL样品液，两侧各点2μL、3μL环己基氨基磺酸标准液。
5.2.3 展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂［正丁醇-浓氨水-无水乙醇（20＋1＋1）
或异丙醇-浓氨水-无水乙醇（20＋1＋1）］的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm以上时，取出在空气中挥干，喷显色剂其斑点呈黄色，背景为蓝色。试样中环己基氨基磺酸的量与标准斑点深浅比较定量（用异丙醇-浓氨水-无水乙醇（20＋1＋1）作展开剂时，环己基氨基磺酸的比移值约为0.47，山梨酸0.73，苯甲酸0.61，糖精0.31）。
（下略）
