中华人民共和国国家标准
GB/T 5009.94-2003
果品－稀土的测定－分光光度三波长法
1 范围
本方法规定了用分光光度三波长法测定稀土的方法。
本方法适用于水果中稀土的测定。
本方法检出限0.1μg(5g试样)。
2 原理
稀土元素与偶氮胂Ⅲ、偶氮胂K混合络合试剂、二苯胍络合组成多元络合物，在pH3.3时，用三波长法于λ1=680nm, λ2=660nm，λ3=640nm波长处测出相应对光吸收值A，按计算式求出ΔA=A2- 的值，并与对应的标准系列比较定量。
3 试剂
3.1 盐酸；
3.2 硫酸；
3.3 硝酸；
3.4 30%过氧化氢；
3.5 盐酸溶液（6mol/L）：量取100mL盐酸，用水稀释至200mL；
3.6 硫酸溶液（6mol/L）：量取50mL硫酸，缓缓倒入200mL水中，冷却后加水至300mL；
3.7 硫酸溶液（3mol/L）：取100 mL6moL/L硫酸（3.6）加水稀释至200mL；
3.8 一氯乙酸-氨缓冲液：用36mL浓氨水倒入900mL水中，缓缓加入50g一氯乙酸，溶解后放置15min，pH计上调节pH至3.3，加水至1000mL；
3.9 磺基水杨酸溶液（100g/L）：称取10g磺基水杨酸，加80mL水溶解，用固体氢氧化钠调节pH值近3.3（约需20粒～30粒），再用1+1的氨水或盐酸调至pH3.3，加水稀释至100mL；
3.10 抗坏血酸溶液（50g/L）：称取5g抗坏血酸，用90mL水溶解后，用1+1的氨水或盐酸调节至pH3.3，加水稀释至100 mL，临用时配制；
3.11 二苯胍乙醇液（150g/L）：称取15g二苯胍，用5mL水润湿，加盐酸溶液（6mol/L）15mL，不断搅拌下加入60mL乙醇，溶解后用1+1的氨水或盐酸调节至pH3.3左右，并用乙醇补足至100mL，最后溶液应透明，不得有沉淀或乳浊状物；
3.12 偶氮胂Ⅲ-偶氮胂K混合络合试剂）（以下简称ⅢK试剂）：量取0.5g/L的偶氮胂Ⅲ水溶液和0.5g/L的偶氮胂K水溶液，以1+1的体积比混合；
3.13 稀土标准溶液：准确称取干燥的La2O3、CeO2、Pr6O11、Nd2O3、Sm2O3（99.5%以上含量）各0.0250g，分别置于小烧杯中，各加4mL盐酸液（6mol/L），置水浴上热溶解[CeO2需滴加3滴过氧化氢（30%）。溶解后稍加热除去过剩的H2O2，各转移入25mL容量瓶内加水稀释至刻度，此溶液每毫升含1.0mg稀土（以氧化物计）。
3.14 稀土标准使用液：分别吸取稀土标准溶液，按La2O3∶CeO2∶Pr6O11∶Nd2O3∶Sm2O3为20∶50∶10∶15∶5的比例，用水稀释成每毫升含5.0μg混合稀土（相当稀土氧化物总量计）。
4 仪器
4.1 电热水浴锅；
4.2 实验用电炉（附调温器）；
4.3 瓷灰化皿：50mL、75 mL；
4.4 高温马福炉；
4.5 具塞刻度试管：10 mL；
4.6 分光光度计；
4.7 pH计。
5 试样制备
取水果的可食部分，水洗干净，晾干或纱布揩干，剁碎或捣碎后混匀。试样不能即时化验，应于85℃烘干后装入广口玻璃瓶，密封存放阴凉处，并记录干鲜比。
6 操作步骤
6.1 试料（样品）的测定
称取蔬菜、水果试样20g～30g，置于瓷灰化皿中，加10mL硫酸液（4.7）浸泡0.5h以上，小火蒸干，继续加热炭化至不冒烟，移入高温炉中，250℃保持1h后，以50℃/0.5h升温至600℃±200℃，灰化4h～6h，冷却后取出，滴加2mL硝酸湿润灰份，蒸干后移入高温炉内，600℃灰化2h，必要时重复一次。用水少量多次洗入10mL刻度管中并稀释至刻度。少量不溶物静置沉淀或离心。
6.2 标准曲线的绘制
吸取0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00mL稀土标准使用液（相当0，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00μg稀土总量）分别置于预先加入2mL一氯乙酸-氨缓冲液的具塞刻度试管中，各加1mL磺基水杨酸溶液（100g/L），1mL抗坏血酸溶液（50g/L），混匀，用水补至约8mL，混匀后放置10min，各加1mL二苯胍乙醇液（150g/L），即刻摇匀，溶液应清澈透亮无浑浊，然后各加1mLⅢK络合试剂，混匀，20min后，用3cm杯，于分光光度计上以零管调节零点，分别在波长λ1=680nm, λ2=660nm，λ3=640nm处测其对应的吸光度。按式ΔA=A2- 计算各标准的ΔA值，以ΔA值为纵坐标，对应的标准含量为横坐标绘制标准曲线。
6.5 吸取2.0mL～4.0m L试样制备液和同量的试剂空白溶液，分别置于预先加入2mL一氯乙酸-氨缓冲液的具塞试管中，以下按6.2自“各加1mL 磺基水杨酸溶液（100g/L）”起依法操作，并与标准比较定量。
（下略）
