中华人民共和国国家标准
GB/T 5009.87-2003
果品制品－磷的测定－分光光度法
1 范围
本方法规定了用分光光度计法测定果品制品中的磷含量。
本方法适用于果果品制品中磷酸盐的测定。
本方法检出限均为2μg，线性范围为5μg～10μg。
2 原理
果品制品中的有机物经酸氧化，使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷酸钼酸铵。此化合物对苯二酚、亚硫酸钠还原成蓝色化合物－钼蓝。用分光光度计在波长660nm处测定钼蓝的吸收值，以定量分析磷含量。
3 试剂
3.1 硫酸：相对密度1.84；
3.2 高氯酸－硝酸消化液：1＋4混合液；
3.3 硫酸溶液（15%）：取15mL硫酸徐徐加入到80mL水中混匀。冷却后用水稀释至100mL；
3.4 钼酸铵溶液：称取0.5g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24•4H2O]用15%硫酸稀释至100mL；
3.5 对苯二酚溶液：称取0.5g对苯二酚于100mL水中，使其溶解，并加入一滴浓硫酸（减缓氧化作用）；
3.6 亚硫酸钠溶液：称取20g无水亚硫酸钠于100mL水中，使其溶解。此溶液需于试验前临时配制，否则会使钼蓝溶液发生混浊；
3.7 磷酸标准储备液（100μg/mL）：精确称取在105℃下干燥的磷酸二氢钾（优级纯）0.4394g，置于1000mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。此溶液每毫升含100μg磷；
3.8 磷标准使用液(10μg/mL)：准确吸取10mL磷标准储备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升含磷10μg。
4 仪器
4.1 实验室常用设备；
4.2 分光光度计。
5 操作步骤
5.1 试样处理
5.1.1 称取各类果品制品的均匀干样0.1～0.5g或湿样2～5g（样品磷含量低时，可适当增加，如果汁饮料25mL）于100mL凯氏烧瓶中，加入3mL硫酸、3mL高氯酸－硝酸消化液，置于消化炉上，瓶中液体初为棕黑色，待溶液变成无色或微带黄色清亮液体时，即消化完全。将溶液放冷，加20mL水，冷却后转移至100mL容量瓶中。用水多次洗涤凯氏烧瓶，洗液合并倒入容量瓶内，加水至刻度，混匀。此溶液为样品测定液。
5.1.2 取与消化样品同量的硫酸、高氯酸－硝酸消化液，按同一方法做空白溶液。
5.2 磷标准曲线
准确吸取磷标准使用液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL(相当于含磷量0、5、10、20、30、40、50μg)，分别置于20mL具塞试管中，依次加入2mL钼酸溶液摇匀，静置几秒钟。加入1mL亚硫酸钠溶液，1mL对苯二酚溶液摇匀。加水至刻度，混匀。静置0.5h以后，在分光光度计660nm波长处测定吸光度。以测出的吸光度对磷含量绘制标准曲线。
5.3 样品测定
准确吸取样品测定液2mL及同量的空白溶液(5.1.2)，分别置于20mL具塞试管中，其余操作步骤同标准曲线(5.2)。以测出的吸光度在标准曲线上查得未知液中的磷含量。
(下略)
