中华人民共和国国家标准
GB T16771-1997
橙、柑、桔汁及其饮料－总D-异柠檬酸的测定－紫外分光光度法
1 范围
本方法规定了橙、柑、桔汁及其饮料中D-异柠檬酸的测定方法。
本方法适用于判定橙、柑、桔浓缩汁和果汁，以及果汁含量不低于2.5%的橙、柑、桔汁饮料的总D-异柠檬酸的测定。
2 原理
在异柠檬酸脱氢酶（ICDH）催化下，样品中的D-异柠檬酸盐与烟酰胺-腺嘌呤-双核苷酸磷酸（NADP）作用，生成NADPH 的含量，相当于D-异柠檬酸盐的量。在波长340nm处测定吸光度，确定样品中总D-异柠檬酸的含量。
D-异柠檬酸盐＋NADP ICDH α-氧化戊酸盐＋NADPH＋CO2＋H＋
3 试剂
本试验方法中，所用试剂均为分析纯；实验用水应符合GB 6682 中二级水规格。
3.1 盐酸溶液（4mol/L）：量取33.4mL盐酸，用水定容至100mL；
3.2 氢氧化钠溶液（4mol/L）：称取16g氢氧化钠，加水溶解，定容至100mL；
3.3 氨水；
3.4 氯化钡溶液（300g/L）：称取30g氯化钡，溶解于热水中，冷却后定容至100mL；
3.5 硫酸钠溶液（71g/L）：称取71g无水硫酸钠，溶解于水中，定容至1000mL；
3.6 丙酮；
3.7 缓冲溶液：称取2.4g三羟甲基氨甲烷和0.035g乙二胺四乙酸二钠，用80mL水溶解。先用4mol/L的盐酸调整pH=7.2左右，再用1mol/L盐酸溶液调整pH=7.0（用酸度计测定），用水定容至100mL；
3.8 洗涤溶液：量取150mL水，加入10mL氨水、100mL丙酮，混匀；
3.9 组合试剂盒（Cat No.414433）；
1号瓶：内含咪唑缓冲液（稳定性）30mL，pH=7.1；
2号瓶：内含β-烟酰胺-腺嘌呤-双核苷酸-磷酸二钠45mg、硫酸锰10mg；
3号瓶：内含异柠檬酸脱氢酶2mg，5（U）个活力单位；
3.10 NADP溶液：将1号瓶内的溶液升温至20～25℃，倒入2号瓶中，使2号瓶的物质全部溶解，混合均匀；
3.11 异柠檬酸脱氢酶溶液：用1.8mL水溶解3号瓶的物质，混合均匀。
4 仪器与设备
实验室常规仪器、设备及下列各项。
4.1 紫外分光光度计：带石英比色皿，光程1cm；
4.2 酸度计：精度0.1pH单位；
4.3 离心机：转速不低于4000 r/min，离心管容各大于80mL；
4.4 微量可调移液管：10～50μL，允许误差（%）为±4.8；100μL微量可调移液管，允许误差（%）为±2.0；500μL微量可调移液管，允许误差（%）为±1.0，1000μL微量可调移液管，允许误差（%）为±1.0；
4.5 玻璃棒或塑料棒：自制，直径约3mm，一端带钩；
4.6 分析天平：感量0.1mg；
4.7 天平：感量10 mg；500 mg；1 g。
5 试液的制备
5.1 果汁型碳酸饮料：称取500g样品于1000mL烧杯中，加热煮沸，在微沸状态下保持5min，并不断搅拌。待二氧化碳基本除净后冷却至室温，称量。用水补足至加热前的质量，备用。
5.2 浓缩果汁、果汁、果汁饮料、水果饮料：混匀后备用。
(下略)
